说明: 研究项目概况
说明: 样本运输条件及保存条件: 组织样本: 1.    组织样本应立即放置-20℃。 2.    运输过程采用液氮,干冰,市内运输可选用冰袋。 3.    样本量不低于100 mg。 4.    请告知组织种属和类型,如肝脏、脾脏等。 细胞样本 1.    有严格时间节点的实验需客户自行裂解样本,提取蛋白,采用干冰运输。 2.    客户离心收集好的细胞、悬浮细胞、贴壁细胞都需用冰袋维持4℃运输,不可使用干冰和液氮。 3.    所提供细胞量不低于106。 特殊样本 1.    全血采用冰袋维持4℃运输,严禁用干冰和液氮运输,血清和血浆可采用液氮,干冰,冰袋运输。 2.    植物组织应采用干冰或液氮运输,防止植物褐化,氧化。 3.    客户处理好已经变性的样本,液氮,干冰,冰袋均可运输。
说明: 1、组织样本         客户自己固定的组织样本需满足要求: (1)    固定液体积至少为组织样本体积5倍以上; (2)    组织样本厚度不要超过5毫米(灌注固定的脑组织除外); (3)    问清楚客户组织样本包埋切面方向; (4)    固定好的组织样本只能在常温或4度条件保存或运输,严禁冰冻; (5)    问清楚骨头组织有没有脱钙; (6)    问清楚做冰冻切片的脑组织有没有用30%蔗糖进行脱水; (7)    不清楚能否做的实验样本,第一时间咨询技术员。  2、细胞爬片        客户自己固定好的细胞爬片需满足要求: (1)    问清楚细胞种属类型,细胞接种密度及细胞贴壁牢不牢固等信息; (2)    不能接收没有及时固定的细胞爬片; (3)    固定好的细胞爬片在4度条件保存或运输,严禁冰冻。  3、蜡块 (1)    核对清楚要做的蜡块数量; (2)    确定好哪些蜡块做哪些实验。  4、石蜡切片 (1)    问询清楚切片组织信息及种属信息,是否已烤好片; (2)...
案例名称: 常见问题FAQ-CCK-8
说明: 常见问题FAQ Q : CCK-8试剂盒检测细胞增殖和毒性的优点有哪些?A : CCK-8较传统的MTT法优点在于1) MTT被线粒体内的一些脱氢还原酶还原成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解,而CCK-8产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤; 2) CCK-8检测灵敏度更高,更加稳定; 3)酚红和血清对其测定无明显影响; 4)不必去上清,不必洗,涤细胞,更加简便; 5)对细胞无明显毒性,加入显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,而且不影响细胞进行后续实验。 Q :在做细胞的加药实验时,药物对CCK-8测定是否有影响?如何解决?A :1)注意如果药物具有还原性(如维生素C),会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度。2)药物中的金属对CCK-8显色有影响:当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%,15%, 90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话,将会100%抑制。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。3)由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前,建议使用一个孔作一下检测,有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常的0D值应该在0.4以下。 Q : CCK-8如何设定空白对照?A :在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。 Q : CCK...
案例名称: 常见问题FAQ-qPCR
说明: Q:qPCR与普通PCR的区别是什么?名称特点普通PCR在PCR反应结束后对终点产物进行电泳定量分析,误差较大。qPCR实时检测PCR扩增过程,在扩增的指数期对起始模板量进行定量分析,重复性好,误差小。 Q:请问进行相对定量检测前提供组织样本时需要将组织块定量吗?A:不需要,采用qPCR相对定量法主要是以表达量稳定的内参基因作为对照从而判断目的基因相对表达丰度。我们在实验操作中会对各个环节进行把控,确保实验结果的客观性:1)组织抽提的RNA会进行定量;2)正式上机前对样本进行RT-PCR检测确定反应条件;3)上机检测后的相对定量数据分析,计算每个样本目的基因对相对稳定的内参基因的表达差异,可以排除上样量的差别对数据分析的影响。 Q:可以进行miRNA的荧光定量PCR检测服务吗?与编码基因的qPCR操作流程上有何区别?  A:可以,采用专用的miRNA荧光定量PCR试剂盒即可。与编码基因的qPCR检测流程上的主要区别是需要将提取后的RNA,用poly(A) 聚合酶在其3’末端加尾,再用5’端带40nt延伸序列的单碱基锚定Oligo-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBR   Green实时定量PCR扩增。其中miRNA的引物设计需要大量摸索,才能获得重复性高可信度高的数据。 Q:如何制备绝对定量 PCR 的标准品?A:将欲定量基因的一小段序列(200-300bp)克隆到T载体上,经测序验证后,进行小量抽提,采用分光光度计定量,按照公式计算拷贝数后梯度稀释,用于上机绘制标准曲线,从而计算待检测基因的拷贝数多少。 Q:荧光定量PCR有哪些注意要点?A:荧光定量PCR的关键步骤在于RNA的抽提和引物的设计。RNA的抽提需要严格进行RNasefree的操作,抽提的RNAO...
说明: 实验原理       细胞免疫化学与免疫组织化学实验都是依据抗原抗体反应和化学显色的原理,采用标记的特异性抗体对组织或细胞内抗原的分布进行原位检测技术。细胞免疫化学将培养处理后的细胞爬片、固定、破膜、封闭后,加入一抗与抗原蛋白结合,再加入标记有荧光素的二抗与一抗进行反应,最后通过激光共聚焦扫描显微镜进行荧光拍摄来显示细胞中靶蛋白的表达变化和定位。激光共聚焦扫描显微镜(Confoccal Laser Scanning Microscope, CLSM)是现在最先进的细胞生物医学分析仪器之一,采用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬间成像的物点。从一个点光源发射的探测光通过透镜聚焦到被观测物体上,如果物体恰在焦点上,那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源,这就是所谓的共聚焦。由于激光束的波长较短,光束很细,所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力,大约是普通光学显微镜3倍。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可以获得样品不同深度层次的图像,这些图像信息都储于计算机内,通过计算机分析和模拟,就能显示细胞样品的立体结构。 技术应用检测靶蛋白如内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物。
说明: (1)原代培养材料的选择,尽量选取繁殖能力较强的组织,如胚胎、幼小的生物体或者肿瘤组织等。 (2)要注意无菌操作。其操作要求应高于外科手术、 (3)整个取材操作要迅速,尤其孕鼠浸泡乙醇时间1min左右,不能过长,以确保胚胎细胞活性。 (4)运用消化法时胰酶温度应低于37℃,浓度只需平时消化细胞浓度的一半。因为此过程不像消化培养细胞时的1~10min,而是至少20min,先消化下来的细胞在此胰酶消化液中继续消化了10min以上。所以胰酶不能作用过强,否则这些细胞易被损伤而不易生存。 (5)如使用组织块法,则应待组织块略干燥,能黏附于瓶壁时再使之与培养液接触,匆使组织块漂浮起来。如果组织块没有黏壁,则细胞不易生长,即使生长也因没有贴在瓶壁上,从而因不能观察到而无法收集到生长的细胞。 (6)原代培养操作时,也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗涤子宫、胚胎或组织块等。 (7)本实验也可以使用新生乳鼠做培养材料。此时要将乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮肤充分消毒,由于乳鼠原代培养污染概率更高,故应小心操作,避免污染细菌。乳鼠原代培养细胞的存活率不及胚胎细胞培养的成功率。
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