实时荧光定量PCR检测
实验原理
实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程，最后通过内参对照计算目的基因表达差异分析或通过标准曲线对未知模板进行定量分析，具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。
实验流程
SYBR GREEN 法和 TaqMan 探针法的区别
方法 | 优点 | 缺点 | 应用 |
SYBR GREEN 法 | 方便快捷，不必针对各个基因设计合成TaqMan探针，具有价格优势。 | 无模板特异性，对引物特异性要求较高，需进行熔解曲线分析；灵敏度相对较低。 | 应用于基因的差异表达分析，比如RNA干扰效果确认。 |
TaqMan 探针法 | 荧光化合物标记到特异性的寡核苷酸上，具有高度特异性，重复性好，荧光信号强。 | 只适合一个特定的目标，探针价格较高。 | 通常应用于基因拷贝数的确定，在临床诊断中常用，比如病毒和病原菌定量检测。 |
技术应用
定量方法 | 原理 | 技术应用 |
绝对定量 (Absolute Quantification，AQ) | 是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数。 | 病原体检测； 转基因食品检测； 基因表达研究。 |
相对定量 (Relative Quantification，RQ) | 测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。 | 基因在不同组织中的表达差异；药物疗效考核；耐药性研究。 |