稳转细胞系的构建

实验原理

       稳定转染就是将外源基因DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 

       瞬时转染/感染的特点:外源DNA不整合到宿主的染色体中,一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数,产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天);外源基因的表达水平不存在整合位点的问题,不会受到周围染色体元件的影响;瞬时转染所需的人力和时间比稳转少,但DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大,因此表达不长久也不稳定。

      稳转细胞株的特点:经合适的药物浓度进行药物筛选后,可得到外源DNA整合到宿主染色体的细胞,这些细胞可以长时间表达外源目的基因,稳定表达细胞株弥补了瞬时感染(或转染)实验中外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的抗性筛选有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、灭稻瘟素(Blasticidin)等。若实验需求构建稳转细胞株,我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法,此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组,且整合位点处于转录相对活跃的区域,从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。

       HTHealth具有丰富的稳转细胞系构建经验,可为客户提供悬浮细胞/贴壁细胞的过表达/干扰基因多克隆/单克隆稳转细胞系构建服务。


 技术应用

如秩序要观察外源基因表达后较短时间内就能检测的细胞功能,可使用瞬时转染/感染。即在转染后24至96小时内收获细胞;如需要长期观察外源基因表达的作用,进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究或需要进行大规模蛋白合成则需要构建稳转株。

 


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实验原理

       稳定转染就是将外源基因DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 

       瞬时转染/感染的特点:外源DNA不整合到宿主的染色体中,一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数,产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天);外源基因的表达水平不存在整合位点的问题,不会受到周围染色体元件的影响;瞬时转染所需的人力和时间比稳转少,但DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大,因此表达不长久也不稳定。

      稳转细胞株的特点:经合适的药物浓度进行药物筛选后,可得到外源DNA整合到宿主染色体的细胞,这些细胞可以长时间表达外源目的基因,稳定表达细胞株弥补了瞬时感染(或转染)实验中外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的抗性筛选有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、灭稻瘟素(Blasticidin)等。若实验需求构建稳转细胞株,我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法,此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组,且整合位点处于转录相对活跃的区域,从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。

       HTHealth具有丰富的稳转细胞系构建经验,可为客户提供悬浮细胞/贴壁细胞的过表达/干扰基因多克隆/单克隆稳转细胞系构建服务。


 技术应用

如秩序要观察外源基因表达后较短时间内就能检测的细胞功能,可使用瞬时转染/感染。即在转染后24至96小时内收获细胞;如需要长期观察外源基因表达的作用,进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究或需要进行大规模蛋白合成则需要构建稳转株。

 


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2019 - 03 - 21
简介:     HTHealth拥有一支语言功底深厚、经验丰富、敬业守信的翻译队伍和多学科背景的专家团队。我们的工作人员由在生命医学领域具有丰富英文科学论文写作、发表及修改经验和具有中国成长背景的留美博士及地道美国英文专家共同为您修改您在生命科学、医学、农学、环境、食品等相关领域的学术论文并免费提供论文发表的全程咨询,帮助您的论文在SCI(Science Citation Index)刊源国际学术期刊上早日发表! 我们的服务: 1、提供中英文医学论文评估、校对、编辑、翻译、改写服务,并免费为论文提供协助、咨询和投稿信、修改稿及答复信的校对服务,直至论文发表为止。承诺:“你不放弃,我们决不放弃!”我们相信,经过我们的加工,绝大多数论文最终都能在英文医学杂志中找到合适的归宿。2、论文全程发表服务是全程一对一的的全程服务,一次收费全程服务到底,全...
2019 - 03 - 21
理化检测实验中,我们基本都采用国标方法进行样品前处理操作和检测,每种不同的指标请依据样品要求提供,我们的检测收费均已包含前处理费用。       样品前处理:通过物理化学手段将目标样品处理成可以被仪器分析的状态,包括烘干、提纯、萃取、过滤、过滤、蒸馏、离心处理等方法。              数据检测及分析:对前处理后的样品,通过相应的仪器分析,得到目标样品的各组分比例和含量。       检测植物的理化指标研究主要是侧重于“高等植物”的检测分析,首先对植物材料进行提取和分离,进而利用物理化学手段对植物材料中的元素(例如氮磷钾金属元素等),化合物(糖类、生物碱、氨基酸醌类和萜类)以及性状进行检测,对比对不同环境、不同材料部位中的相...
2019 - 03 - 21
全基因组测序分为:从头测序(de novo sequencing)和重测序(re-sequencing)。       从头测序(de novo):不需要任何参考基因组信息即可对某个物种的基因组进行测序,利用生物信息学分析方法进行拼接、组装,获得该物种的基因组序列图谱,从而推进该物种的后续研究。基因组重测序: 是对有参考基因组物种的不同个体进行的基因组测序,并在此基础上对个体或群体进行差异性分析。基因组重测序主要用于辅助研究者发现单核苷酸多态性位点(SNPs)、拷贝数变异(CNV)、插入/缺失(Indel)等变异类型,以较低的价格将单个参考基因组信息扩增为生物群体的遗传特征。全基因组重测序在人类疾病和动植物育种研究中广泛应用。技术路线 生物信息分析
2019 - 03 - 21
SNP/单核苷酸多态性分析       SNP(Single Nucleotide Polymorphism),即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。一般来说,一个SNP位点只有两种等位基因,因此又叫双等位基因。SNP在人类基因组中的发生频率比较高,大约平均每1000个碱基中就有一个多态位点。有些SNP位点还会影响基因的功能,导致生物性状改变甚至致病。单核苷酸多态性是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据,因此被广泛用于群体遗传学研究(如生物的起源、进化及迁移等方面)和疾病相关基因的研究,在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。 服务项目1. TaqMan探针法       针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PC...
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