• CRISPR/Cas9是一种能够对任何物种基因组的特定位点进行精确编辑的技术。使用该技术能够进行细胞水平和 动物水平的单基因或多基因的组成型/条件性/组织特异性敲除,敲入或定点突变。其原理是Cas9蛋白通过导向 性RNA (guide RNA, sgRNA) 识别特定基因组位点并进行剪切。CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中,CRISPR系统共分成3类,其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可,这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前,来自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白(含有两个核酸酶结构域,可以分别切割DNA两条单链)。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。由于PAM序列结构简单(5’-NGG-3’),几乎可以在所有的基因中都能找到大量靶点,因此得到广泛的应用。CRISPR/Cas9技术已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞,是目前较高效的基因...
    发布时间: 2019 - 03 - 18
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