液质联用技术HPLC-MS/MS
利用LC-MS/MS蛋白鉴定技术对胶条样本(即SDS-PAGE样本)、IP、co-IP、Pull-down等纯化溶液中等复杂样本进行蛋白鉴定。
技术原理
HPLC-MS/MS又叫高效液相色谱-质谱联用技术,它以液相色谱作为分离技术,质谱作为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离,被离子化后经过质谱仪质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器的到质谱图,液质联用体现了色谱和质谱的优势互补,将色谱对复杂样品的高分离能力,与MS具有高选择性、高灵敏性及能够提供相对分子质量与结果信息的优点结合起来,在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域的到了较多的应用。
技术路线
仪器类型
Thermo-Scientific Q Exactive
应用范围
相互作用蛋白复合体或多肽的鉴定
技术优势
适合复杂样品的蛋白鉴定,如相互作用洗脱的蛋白混合液、胶条等
周期短,通量高
样品要求
1.双向凝胶胶点:考染、银染(质谱兼容)点清晰可见
2.SDS-PAGE条带:考染、银染(质谱兼容)点清晰可见
3.蛋白质溶液:蛋白总量>5μg,浓度>0.1μg/ul,缓冲液不含去污剂SDS、NP40,Triton X-100等